div  FAQ  div    div    div    div    div    div   
Microscopist.ru arrow ПЭМ (Методы) arrow Блоки для ПЭМ. Возможные причины неудач. SOS!!!!!!!

Блоки для ПЭМ. Возможные причины неудач. SOS!!!!!!!
     
Biotechnology220
Новенький

: 4
: 29.09.2017
: Республика Казахстан, г. Алматы
: 29 2017 12:35     : Блоки для ПЭМ. Возможные причины неудач. SOS!!!!!!!

Здравствуйте, уважаемые коллеги! Меня зовут Марина и я осваиваю методику пробоподготовки к ПЭМ. Проблема следующая: заключила объекты в смолу, смола полимеризовалась, но имеются пузырьки. Как сильно это повлияет на срезы и качество изображения (срезы еще ни разу не делала)?
Пожалуйста подскажите....
    e-mail
olo2011
Бывалый

: 30
: 25.09.2017
: г. Дубна Московской области
: 29 2017 18:36     :

Я очень давно занимался срезами - в конце 70-х. Могу сказать, что всё зависит от того, как эти пузырьки расположились. Вообще-то, это конечно не хорошо, что пузырьки там есть. Существуют методики, которые позволяют от пузырьков избавляться. И надо бы всё это соблюдать не торопясь и аккуратно. Но можно попробовать и так - если пузырёк не попадёт в плоскость среза, то всё может получиться. А по-хорошему, лучше бы переделать как следует...
Biotechnology220
Новенький

: 4
: 29.09.2017
: Республика Казахстан, г. Алматы
: 29 2017 18:46     :

olo2011 ():
Я очень давно занимался срезами - в конце 70-х. Могу сказать, что всё зависит от того, как эти пузырьки расположились. Вообще-то, это конечно не хорошо, что пузырьки там есть. Существуют методики, которые позволяют от пузырьков избавляться. И надо бы всё это соблюдать не торопясь и аккуратно. Но можно попробовать и так - если пузырёк не попадёт в плоскость среза, то всё может получиться. А по-хорошему, лучше бы переделать как следует...
Благодарю Вас за ответ. Не могли бы Вы поделиться со мной методиками избавления от пузырьков, если таковые имеются у Вас, а если нет, то пожалуйста сообщите название или примерно где их можно найти.
    e-mail
olo2011
Бывалый

: 30
: 25.09.2017
: г. Дубна Московской области
: 29 2017 19:19     :

Сейчас не просто найти все записи и конспекты... Могу посоветовать хорошую книгу: Дэниэл Пиз, "Гистологическая техника в электронной микроскопии". Мне кажется, она была в библиотеке портала. Книга, правда, древняя довольно - кажется, начало 70-х. Или даже конец 60-х. Но там есть описания всех основных методик получения срезов. А чем Вы пользовались? Какими смолами?
olo2011
Бывалый

: 30
: 25.09.2017
: г. Дубна Московской области
: 29 2017 19:21     :

Насколько я помню, удалять пузырьки можно в процессе медленного нагрева смеси... Но точных режимов сейчас перед глазами нет...
Biotechnology220
Новенький

: 4
: 29.09.2017
: Республика Казахстан, г. Алматы
: 29 2017 21:13     :

olo2011 ():
Насколько я помню, удалять пузырьки можно в процессе медленного нагрева смеси... Но точных режимов сейчас перед глазами нет...
Спасибо большое за рекомендацию.
Я использовала следующий состав смолы: эпон 812, аралдит м, DDSA, катализатор DMP 30.
    e-mail
Bananan
Бывалый

: 246
: 13.09.2007
: Самара
: 02 2017 07:23     :

Извините, что вклиниваюсь. Именно с такой смолой не сталкивался, но при заливке шлифов для РЭМ мы эпоксидную смолу после размешивания вакуумируем, что позволяет избавиться от пузырьков. И только после этого заливаем образцы.
   ICQ Number
Biotechnology220
Новенький

: 4
: 29.09.2017
: Республика Казахстан, г. Алматы
: 03 2017 06:58     :

Bananan ():
Извините, что вклиниваюсь. Именно с такой смолой не сталкивался, но при заливке шлифов для РЭМ мы эпоксидную смолу после размешивания вакуумируем, что позволяет избавиться от пузырьков. И только после этого заливаем образцы.
После перемешивания смолы я ставила ее в открытом виде в термостат при температуре 37С на 1 час и пузырьки, образовавшиеся при смешивании, исчезали. Но вот при заливке объектов, как бы ни старалась наливать смолу без перемешивания и какого-либо ее движения в посуде, пузырьки вновь образовывались..Пыталась убрать их при помощи зубочистки плавным выведением наверх (частично получилось), но часть все равно осталась. Я заливала смолой объекты в таблетницах, в которых имелись выпуклости в виде букв и цифр, что, по видимому, послужило образованию пузырьков (смолу наливала со стороны объектов, но это не помогло). Старалась максимально соблюдать пропорции при приготовлении смолы. Полимеризацию делала в термостате при температуре 60С два дня, могло ли это послужить причиной моей проблемы?
    e-mail
olo2011
Бывалый

: 30
: 25.09.2017
: г. Дубна Московской области
: 03 2017 09:27     :

С эпоном я не работал, только с аралдитом. Заливку делали в специальные формы. Они продаются готовые, похожи на маленькие пластмассовые патрончики. Насколько я помню, подготовку в несколько этапов проводили. Сначала пропитывали образец в жидком растворе аралдита - он, кажется, пропиленоксидом растворяется. Потом в форму помещали образец и сверху заливали уже аралдитом нужной концентрации. Кстати, идея вакуумировать заливку вполне здравая, на мой взгляд.

PS. Пробовал найти свои старые записи, но безрезультатно, к сожалению....
olo2011
Бывалый

: 30
: 25.09.2017
: г. Дубна Московской области
: 03 2017 09:53     :

Кстати, а посмотрите вот эту ветку дискуссии: http://www.microscopist.ru/forum/viewtopic.php?t=99&postdays=0&postorder=asc&start=40
Тут как раз о срезах речь. И где-то на третьей странице появляются рецепты какие-то... Smile
Вот цитата из той дискуссии:
"...вакуум не вакуум, а помогает неплохо.
Последние несколько лет я использую махонький (даже не знаю, сколько он выдает) форнасос с холодовой ловушкой. Помогает очень даже неплохо! Пропитка даже крупных и плотных образцов намного лучше, плюс уходят все пузырьки воздуха. Единственный минус - если пузырей много - может полезть пена и загадит все вокруг..."
Bananan
Бывалый

: 246
: 13.09.2007
: Самара
: 03 2017 10:04     :

После заливки еще раз вакуумируем. Связано с тем, что высота форм для заливки относительно низкая, и при кипении обляпывается формочка. В случае с предварительным вакуумированием в высокой таре- результат чище.
Дело в том, что выдерживая эпоксидку не избавляетесь от всех пузырьков, мелкие остаются.
То есть весь процесс у нас такой: -размешали, минут 5-10 отстоялось, за это время крупные пузырьки всплыли, далее стаканчик в пост, прогнали, разлили в формы еще раз прогнали.
В инструкции прописано 2 дня на 60 градусах проводить полимеризацию?
Повторюсь, упомянутую эпоксидку не применял, только на мой взгляд невыгодно, 2 суток полимеризации, да еще и в термостате. У нас стандартная имеется, полимеризация 6 или 8 часов. И имеется еще какая то (не используем практически) после заливки на 100 градусов, кратковременно.
   ICQ Number
:   
     
1 1


|| || || ||
|| || ||

©2002 - Microscopist.ru -
: : : :faq : Rambler's Top100 @Mail.ru
Powered by phpBB © 2001-2003 phpBB Group | : GMT + 3