Начало div  FAQ  div  Поиск  div  Пользователи  div  Группы  div  Избранное  div  Регистрация  div  Вход 
FORMVAR или мазахизм
На страницу Пред.  1, 2, 3, 4, 5  След.
 
Начать новую тему   Ответить на тему    Список форумов Microscopist.ru -> Подготовка образцов
Предыдущая тема :: Следующая тема  
Автор Сообщение
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Пн 28 Январь 2008 19:32    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
ФВК у меня при pH 6 лучше всего себя ведет
В лабе действительно дубак - 6 градусов.


Видимо, низкая температура тогда виновата. На метанольные р-ры она меньше влияет.
У меня ФВК лучше красит при 6.8 - 7.0. Для мелких объектов (вирусов) рН еще понижаю, контраст вроде как чуть выше.
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 14:15    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

В смысле, понижаешь?
6 как раз и ниже Very Happy

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 14:51    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
В смысле, понижаешь?
6 как раз и ниже Very Happy

Понижаю ниже 6.8, имелось ввиду. Но ниже 6.6 не пробовал.
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 15:48    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

у меня выше 6,5 ерунда какая-то всегда лезла...
Может, в Лаб2 напишите небольшое руководство по нег.контрастированию?
Заодно и по подложкам....
Я поучаствовать готов

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 16:18    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
у меня выше 6,5 ерунда какая-то всегда лезла...
Может, в Лаб2 напишите небольшое руководство по нег.контрастированию?
Заодно и по подложкам....
Я поучаствовать готов


А в чем эта ерунда выражалась?

По подложкам - пожалуйста. Так, как это делаю я, опишу.
По негативному - тоже.
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 17:53    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Ерунда в виде невнятных конгломератов чего-то средней электронной плотности.
Если напишете - с меня причитается!!!!

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 18:06    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
Ерунда в виде невнятных конгломератов чего-то средней электронной плотности.
Если напишете - с меня причитается!!!!

Вы знаете, у меня когда-то давно такое было, когда я пытался красить отечественной ФВК (тогда еще советской). Я ее и чистить пытался (в книге Уикли, кажется, была методика очистки ФВК), толку почти никакого. Работаю только на остатках ФВК фирмы Серва (года 88-го еще). С импортной ФВК подобных проблем даже не возникало. Готовил обыкновенно. 2%-й р-р доводил едким натром до нужной рН.
Крашу несколько секунд, держа сеточку пинцетом и капая на нее ФВК (3-5 капель с интервалом 2-3 секунды). Осушиваю сеточку рваным краем фильтровальной бумаги (мне больше всего нравится "желтая лента", она мягонькая). Если контрастируем однородные частицы (вирусы, например), то после подсушивания сеточки аккуратно опускаю в дистиллят примерно на треть диаметра, быстро вынимаю и снова подсушиваю фильтровашкой. Часто оптимальный контраст бывает на границе отмытой в воде и неотмытой части сеточки. Граница эта в микроскопе довольно широкая. Но чаще всего отмывки не требуется. Да, забыл сказать, отмывке научили когда-то давно, году в 85-м в НИИ ЭМ им. Гамалеи, в лаборатории А.Ф.Быковского, не сам придумал.
Хранится годами, ничего не делается. Забыл конц-ю едкого натра, которым довожу рН, завтра посмотрю на работе в записях.
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 19:21    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Про отмывку не знал, спасибо за совет Very Happy
Теперь с меня точно причитается!
Кстати, попробую подобное с уранилом Rolling Eyes

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 19:45    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

А с формваром вообще танцы с бубном. Готовлю р-р формвара на дихлорэтане. Примерно 0,3 %. Обычно с вечера. К утру он полностью растворится. Методом проб и ошибок понижаю концентрацию формвара до подходящей (отделением пленки от стекла и контролю ее толщины по цвету) добавлением в р-р дихлорэтана. Добавлять формвар - долго ждать, пока новая порция окончательно разойдется. А наоборот - быстрее намного.
Раствор формвара наливаю в мерный цилиндр.
Тщательно мою половинку стекла для ножей. Тщательно мою руки с неоднократным намыливанием. Чистое стекл провожу несколько раз между большим и указательным пальцами правой руки, затем погружаю в цилиндр с р-ром формвара и плавным движением вынимаю из р-ра (не из цилиндра). Держу его так с минуту в парах хлороформа в цилиндру, затем вынимаю и ставлю на 2-3 минуты вертикально на крудок фильтровашки для полного высыхания. Затем бритвенным лезвием разрезаю пленку на стекле (невидимую) на прямоугольнички с таким расчетом, чтобы прямоугольничек помещал 9 - 12 сеточек. Медленно под малым углом погружаем стекло с формваровой пленкой в широкую посудину с дистиллятом. Если и не все прямоугольнички формвара отделятся - не беда. Процедура повторяется до получения нужного количества сеточек, покрытых формваром. Ну, как укладывать сеточки и как их вылавливать с помощью полоски фильтровашки, знают, наверное, все.
Важное замечание. Раствор формвара не храню больше 2-3 дней. Никогда. Всегда использую свежий раствор. Лучше день посижу и сделаю побольше сеточек, чем отложу завершение этой процедуры до следующего свободного дня.
Многие вещи проще показать, чем описать... Sad
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dusha
Дед


Зарегистрирован: 23.01.2003
Сообщения: 2200

СообщениеДобавлено: Ср 30 Январь 2008 20:11    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

А скажите неграмотному: неужели формвар в дихлорэтане так отличается от коллодия в амилацетате, что его нельзя просто капнуть на воду для получения пленки?
Я с формваром никогда не работал...

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
diatome
Новенький


Зарегистрирован: 28.01.2008
Сообщения: 5

СообщениеДобавлено: Чт 31 Январь 2008 07:18    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

неужели формвар в дихлорэтане так отличается от коллодия в амилацетате, что его нельзя просто капнуть на воду для получения пленки?

тогда пленка неровная получается. Если получается...

Цитата:

Готовлю р-р формвара на дихлорэтане. Примерно 0,3 %. Обычно с вечера. К утру он полностью растворится. Методом проб и ошибок понижаю концентрацию формвара до подходящей (отделением пленки от стекла и контролю ее толщины по цвету) добавлением в р-р дихлорэтана.

А мы обычно готовим стоковый 1% раствор и он прекрасно хранится несколько месяцев. И при использовании разбавляем в три раза (исключительно на глаз). пленка стабильно получается ровная и без дырок.
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dusha
Дед


Зарегистрирован: 23.01.2003
Сообщения: 2200

СообщениеДобавлено: Чт 31 Январь 2008 12:45    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

тогда пленка неровная получается. Если получается...

С коллодием все просто шикарно получается. Что может быть ровнее, чем поверхность воды в спокойном состоянии?
Есть еще всякие вариации метода, типа накрыть колпаком с паром, пока пленка не высохла, тогда получается дырчатая подложка.

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Чт 31 Январь 2008 14:26    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

omikron писал(а):
как их вылавливать с помощью полоски фильтровашки, знают, наверное, все.


Э-ээ-э нет, батенька, не все.... Впервые слышу, что ловить можно фильтрашкой....
Поподробнее пожалуйста сие действо опишите...
Shocked

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Чт 31 Январь 2008 15:11    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
omikron писал(а):
как их вылавливать с помощью полоски фильтровашки, знают, наверное, все.


Э-ээ-э нет, батенька, не все.... Впервые слышу, что ловить можно фильтрашкой....
Поподробнее пожалуйста сие действо опишите...
Shocked


Странно... Если я не склерозю, это еще у Уикли описано. Хотя, может быть, ошибаюсь. Разрезаю кружок фильтровашки пополам, каждую половинку изрезаю на полоски шириной 15-18 мм, каждую полоску перегибаю поперек примерно посредине, немного ближе к прямоугольному краю.
На прямоугольнички формваровой пленки, плавающие на воде, укладываю пинцетом сеточки аккуратными рядами. Как уже писал, прямоугольнички нарезаю прямо на стекле бритвенным лезвием. Хороши были лезвия Нева и Спутник, которые изготавливались из темной стали и которыми никто не брился. Стоили они когда-то 25 коп. пачка. Сейчас их не найти, а жаль. Современные лезвия из слишком мягкой стали. При отделении пленки от стекла в воду прямоугольнички разделаются. Если нужно растащить прямоугольнички друг от друга, то на каждый кладу по сеточке и, препаровальными иглами касаясь сеточек (не формвара), растаскиваю прямоугольнички.
Когда прямоугольничек весь закрыт сеточками, прикасаюсь сверху полоской фильтровашки. Как только фильтровашка намокла, сразу же быстро, скользящим движением отрывая от поверхности воды, переворачиваю в воздухе полоску. Сеточки остаются на полоске, покрытые сверху формваром. Тут главное не перемочить фильтровашку, а то сеточки вместе с пленкой утонут.
Полоски фильтровашки с сеточками кладу под настольную лампу, чтобы они просохли, затем обрезаю лишнюю бумагу вокруг сеточек, а сеточки в чашки Петри, чтобы не пылились.
За рабочий день делаю штук 500 и полгода, а то и чуть больше, свободен Smile
Насчет прочности формвара - хранятся сеточки со срезами по многу лет. Недавно понадобилось посмотреть материал, приготовленный в 90-м году. Формвар ведет себя совершенно корректно.
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Пн 04 Февраль 2008 17:05    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Не понравилось с фильтрашкой отлавливать....
Пленка формвара пузыриться на большинстве сеток Sad

P.S. небольшой оффтоп почти нег.контрасту: а Вы опыта по выделению вирусных частиц из тканевых образцов не имеете?

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Пн 04 Февраль 2008 17:22    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
Не понравилось с фильтрашкой отлавливать....
Пленка формвара пузыриться на большинстве сеток Sad

P.S. небольшой оффтоп почти нег.контрасту: а Вы опыта по выделению вирусных частиц из тканевых образцов не имеете?


Сеточки надо класть на формвар выпуклой стороной. Выпуклую сторону сделать легко, провести по гладкой стороне сеточки браншами изогнутого пинцета для сеточек. Тогда ничего не пузырится.

Опыта выделения не имею. В тканях наблюдать приходилось многократно. Из клеточных культур выделял так: замораживал с небольшим остатком питательной среды. В замороженном виде растирал по дну пробирки стеклянной палочкой. Процедуру замораживания и растирания повторял 3-4 раза. Потом доливал буфер, пипетировал. Цетрифугировал на РС-6, чтобы отбить клеточные остатки. Потом в ультрацентрифужную пробирку на дно с помощью специальных приспособ, отлитых из аралдита, помещал сеточки с формваровым слоем. Сверху аккуратно наливал очищенную на цетрифуге вирусную взвесь на буфере (в принципе, можно и на воде), центрифугировал пару часов при 70000-100000 g. Сеточки просматривал. У меня на эту тему был доклад на РКЭМ-2004. А вообще этим методом пользовался несколько лет. Да, грязи многовато, но что делать?
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Пн 04 Февраль 2008 17:33    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

С культурами, (слава Киловольтам!) к счастью, ко мне еще особо не лезут. Хотя ожидается....
Но с суспензиями клеточными - просто достали!!!! Ненавижу эту мерзость заливать....

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру


Зарегистрирован: 06.04.2007
Сообщения: 379
Откуда: Томск

СообщениеДобавлено: Пн 04 Февраль 2008 19:15    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
С культурами, (слава Киловольтам!) к счастью, ко мне еще особо не лезут. Хотя ожидается....
Но с суспензиями клеточными - просто достали!!!! Ненавижу эту мерзость заливать....

А если нежно осадить на центрифужке?
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед


Зарегистрирован: 28.01.2004
Сообщения: 1276
Откуда: Челябинск

СообщениеДобавлено: Вт 05 Февраль 2008 07:20    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Я пользуюсь старой методой, взятой из книги "Электронная гистохимия"
Клетки замуровываются в альбумин, потом это все заливается глутаралем и полученную желеобразную пакость заливаю как ткань (только без осмирования - сильно грязно получается).
Последний шедевральный заказ - наночастицы чего-то-там плавающие в культуре. Пока не знаю, с какой стороны к этой бредятине подкрасться Rolling Eyes

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
smailik007
Бывалый


Зарегистрирован: 04.12.2011
Сообщения: 21

СообщениеДобавлено: Пт 26 Октябрь 2012 12:02    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Скажите пожалуйста, а в какой посудине следует плавить соль? Плавили в фарфоровой эмалированной посуде - кристалл отрывается с боем. Или следует расплавить сначала в одной посудине, потом залить в другую?
Вернуться к началу
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Показать сообщения:   
Начать новую тему   Ответить на тему    Список форумов Microscopist.ru -> Подготовка образцов Часовой пояс: GMT + 3
На страницу Пред.  1, 2, 3, 4, 5  След.
Страница 4 из 5

 
Перейти:  
Вы не можете начинать темы
Вы не можете отвечать на сообщения
Вы не можете редактировать свои сообщения
Вы не можете удалять свои сообщения
Вы не можете голосовать в опросах
Вы не можете добавлять вложения в этом форуме
Вы не можете просматривать вложения в этом форуме


о проекте || новости || публикации || оборудование || события
фотогалерея
|| форум || спонсоры || ссылки

©2002 - Microscopist.ru - портал микроскопистов
:главная :контакты :карта сайта :faq :помощь Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru
Powered by phpBB © 2001-2003 phpBB Group | Часовой пояс: GMT + 3