div  FAQ  div    div    div    div    div    div   
Microscopist.ru arrow ПЭМ (Методы) arrow ПЭМ в микробиологии

ПЭМ в микробиологии
.  1, 2, 3  .
     
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 07 2008 09:02     :

Вот я и пришел жаловаться.
Не знаю, изменилось расположение звезд на небе или еще что произошло, но с нег.контрастом началась полная таки лажа!

1. к подложке ничего не липнет, кроме крупной грязи, типа обрывков коллагена и прочей чепухи
2. контраст "не ложится" на подложку, а оседает в виде глыбок

Страшнее не придумаешь.
Omikron, поделитесь, пожалуйста описанием процедуры по Вашей версии,а? Embarassed

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 07 2008 15:13     :

Какая у Вас подложка? Я негативное делаю только на формваре. На углеродную (термически напыленную) пленку у меня почему-то всегда тоже плохо прилипало.
Зажимаю сеточку в пинцете пленкой вверх, микропипеткой наношу капельку жидкости, из которой хочу посмотреть частицы (вирусы ли, бактерии...), прикрываю чашкой Петри и держу минут 5 - 10. Потом рваным краем фильтровашки с ребра сеточки отсасываю жидкость, и тут же, не дожидаясь полного высыхания, над какой-либо посудиной начинаю капать на поверхность сеточки ФВК. Нанесу каплю, подожду 3-5 сек., нанесу следующую. И так раза 3-5. Потом лишки опять фильтровашкой с ребра сеточки. Сеточку, не вынимая из пинцета, прикрываю снова чашкой Петри и под настольную лампу для просушки. Как только просохла, в микроскоп и смотрю. Хранить лучше не надо. Ведь материал не фиксированный. Если материал патогенный, после адсорбции исследуемого материала фиксирую в парах осмиевой кислоты. Для этого простая приспособа: маленькая чашечка Петри, в крышке дырка чуть меньше сеточки. В чашку микролитров 200 осмия, закрываю крашкой, а на отверстие в крышке сеточку, адсорбированным материалом вниз, внутрь чашечки. Все это под тягой, разумеется. Пара часов.
Если материал сначала зафиксировать, он почему-то хуже адсорбируется. Не знаю, почему, то ли более жестким становится, то ли еще что...
ФВК дает довольно мягкий окрас. Причем (из личного опыта), чем выше рН, тем мягче красит. Но выше 7,0 или 7,2 никогда не делал.
Уранил красит намного контрастнее. Контрастирует, скорее, позитивно, чем негативно. Видимо, отчасти из-за низкой рН.
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 07 2008 15:57     :

Подложки - формвар.
Странно.... Я практически так же делал, только контрастер не наливаю сверху, а кидаю плавать сетку (как со срезами).
Спасибо, попробуем по Вашему Very Happy
А вообще мысль родилась - для улучшения адгезии обработать сетки с подложкой поли-L-лизином или глутаралем.

P.S. а почему фиксация в парах осмия? Почему не параформ? На ночь оставил в 37С в чашке Петри и все....

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 07 2008 16:04     :

Dan758 ():

P.S. а почему фиксация в парах осмия? Почему не параформ? На ночь оставил в 37С в чашке Петри и все....


Да просто, наверное, привык так.
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 09 2008 09:21     :

Кстати, возвращаясь к метОде выделения вирусных частиц: а смысл перемораживать?
Чтобы лучше клеточные структуры разрушить?

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 10 2008 16:23     :

Да, исключительно чтобы клетки порушить. Чтобы внутриклеточные вирусы выползли наружу. Хотя это иногда плохо помогает. На срезах вижу, а на негативном нет...
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 12 2008 12:45     :

Что-то не ладится у меня с уранилом нег.контраст....
Грязи, вроде, немного, но все забито какой-то мелкозернистой мерзостью Neutral
Чуть погодя картинку выложу - безобразие Confused

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 19 2008 16:28     :

Безобразие этот уранил...
Я теперь не знаю, что же я вижу Mr. Green - то ли вЫрус то ли мусор какой Rolling Eyes
Самое обидное - как не развожу уранил , контраст все равно бешеный... или пропадает напрочь
Бяда...

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
injener
Дед

: 3196
: 21.12.2004
: Московская область
: 19 2008 16:42     :

Что Вы там все время роняете-то? Shocked Все уранил да уранил... Laughing
    e-mail
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 19 2008 17:36     :

Штаны падают Mr. Green
Кстати, отсмотрел очередную версию образцов отконтрастированных УРАНИЛАЦЕТАТОМ свинца и остался почти с чувством глубокого удовлетворения Very Happy

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 20 2008 15:06     :

Dan758 ():
Штаны падают Mr. Green
Кстати, отсмотрел очередную версию образцов отконтрастированных УРАНИЛАЦЕТАТОМ свинца и остался почти с чувством глубокого удовлетворения Very Happy


Уранилацетатом свинца? Что-то незнакомое мне...
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 20 2008 15:37     :

Как так незнакомое?
_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 20 2008 16:23     :

Серьезно. Уранилацетат - уксуснокислый уранил. А уранилацетат свинца?
injener
Дед

: 3196
: 21.12.2004
: Московская область
: 20 2008 17:06     :

:
Уранилацетат
Мне тоже казалось, что это с ураном связано... Shocked Или это соль урановой кислоты? Rolling Eyes
    e-mail
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 20 2008 17:17     :

injener ():
:
Уранилацетат
Мне тоже казалось, что это с ураном связано... Shocked Или это соль урановой кислоты? Rolling Eyes

Уранил - это, если склероз не подводит, UO3
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 20 2008 17:33     :

Omikron, а Вы чем срезы контрастируете? Very Happy

Уранилацетат свинца - обыкновенная двойная соль...

Чей-то вы, камрады, меня пугаете... Я аж в книжку заглянул Rolling Eyes со страху...

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 20 2008 17:37     :

Срезы контрастирую сначала полуспиртовым р-ром уранилацетата, а потом цитратом свинца. А вы? Поподробнее, если не трудно.
Dan758
Дед

: 1276
: 28.01.2004
: Челябинск
: 20 2008 18:18     :

То же самое Mr. Green
Только у меня сейчас пошел водный раствор уранилацетата СВИНЦА
А цитрат свинца как обычно... по Рейнольдсу...

Раньше запасал раствор цитрата свинца сделанный по прописи Sato (стабильный как черти-что!), но сейчас пока нет возможности Sad

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
    e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

: 379
: 06.04.2007
: Томск
: 20 2008 18:21     :

А как Вы готовите р-р уранилацетата свинца?
injener
Дед

: 3196
: 21.12.2004
: Московская область
: 20 2008 19:23     :

Dan758 ():
Чей-то вы, камрады, меня пугаете...
Embarassed Embarassed Embarassed И то!.. Возраст... Память...
    e-mail
:   
     
2 3 .  1, 2, 3  .


|| || || ||
|| || ||

©2002 - Microscopist.ru -
: : : :faq : Rambler's Top100 @Mail.ru
Powered by phpBB © 2001-2003 phpBB Group | : GMT + 3