Начало div  FAQ  div  Поиск  div  Пользователи  div  Группы  div  Избранное  div  Регистрация  div  Вход 
Список форумов Microscopist.ru arrow ПЭМ (Методы) arrow ПЭМ в микробиологии

ПЭМ в микробиологии
На страницу Пред.  1, 2, 3  След.
Начать новую тему   Ответить на темуОтветить
Автор Сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Чт 07 Февраль 2008 09:02    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Вот я и пришел жаловаться.
Не знаю, изменилось расположение звезд на небе или еще что произошло, но с нег.контрастом началась полная таки лажа!

1. к подложке ничего не липнет, кроме крупной грязи, типа обрывков коллагена и прочей чепухи
2. контраст "не ложится" на подложку, а оседает в виде глыбок

Страшнее не придумаешь.
Omikron, поделитесь, пожалуйста описанием процедуры по Вашей версии,а? Embarassed

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Чт 07 Февраль 2008 15:13    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Какая у Вас подложка? Я негативное делаю только на формваре. На углеродную (термически напыленную) пленку у меня почему-то всегда тоже плохо прилипало.
Зажимаю сеточку в пинцете пленкой вверх, микропипеткой наношу капельку жидкости, из которой хочу посмотреть частицы (вирусы ли, бактерии...), прикрываю чашкой Петри и держу минут 5 - 10. Потом рваным краем фильтровашки с ребра сеточки отсасываю жидкость, и тут же, не дожидаясь полного высыхания, над какой-либо посудиной начинаю капать на поверхность сеточки ФВК. Нанесу каплю, подожду 3-5 сек., нанесу следующую. И так раза 3-5. Потом лишки опять фильтровашкой с ребра сеточки. Сеточку, не вынимая из пинцета, прикрываю снова чашкой Петри и под настольную лампу для просушки. Как только просохла, в микроскоп и смотрю. Хранить лучше не надо. Ведь материал не фиксированный. Если материал патогенный, после адсорбции исследуемого материала фиксирую в парах осмиевой кислоты. Для этого простая приспособа: маленькая чашечка Петри, в крышке дырка чуть меньше сеточки. В чашку микролитров 200 осмия, закрываю крашкой, а на отверстие в крышке сеточку, адсорбированным материалом вниз, внутрь чашечки. Все это под тягой, разумеется. Пара часов.
Если материал сначала зафиксировать, он почему-то хуже адсорбируется. Не знаю, почему, то ли более жестким становится, то ли еще что...
ФВК дает довольно мягкий окрас. Причем (из личного опыта), чем выше рН, тем мягче красит. Но выше 7,0 или 7,2 никогда не делал.
Уранил красит намного контрастнее. Контрастирует, скорее, позитивно, чем негативно. Видимо, отчасти из-за низкой рН.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Чт 07 Февраль 2008 15:57    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Подложки - формвар.
Странно.... Я практически так же делал, только контрастер не наливаю сверху, а кидаю плавать сетку (как со срезами).
Спасибо, попробуем по Вашему Very Happy
А вообще мысль родилась - для улучшения адгезии обработать сетки с подложкой поли-L-лизином или глутаралем.

P.S. а почему фиксация в парах осмия? Почему не параформ? На ночь оставил в 37С в чашке Петри и все....

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Чт 07 Февраль 2008 16:04    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):

P.S. а почему фиксация в парах осмия? Почему не параформ? На ночь оставил в 37С в чашке Петри и все....


Да просто, наверное, привык так.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Сб 09 Февраль 2008 09:21    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Кстати, возвращаясь к метОде выделения вирусных частиц: а смысл перемораживать?
Чтобы лучше клеточные структуры разрушить?

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Вс 10 Февраль 2008 16:23    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Да, исключительно чтобы клетки порушить. Чтобы внутриклеточные вирусы выползли наружу. Хотя это иногда плохо помогает. На срезах вижу, а на негативном нет...
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Вт 12 Февраль 2008 12:45    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Что-то не ладится у меня с уранилом нег.контраст....
Грязи, вроде, немного, но все забито какой-то мелкозернистой мерзостью Neutral
Чуть погодя картинку выложу - безобразие Confused

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Вт 19 Февраль 2008 16:28    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Безобразие этот уранил...
Я теперь не знаю, что же я вижу Mr. Green - то ли вЫрус то ли мусор какой Rolling Eyes
Самое обидное - как не развожу уранил , контраст все равно бешеный... или пропадает напрочь
Бяда...

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
injener
Дед

Сообщения: 3196
Зарегистрирован: 21.12.2004
Откуда: Московская область
СообщениеДобавлено: Вт 19 Февраль 2008 16:42    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Что Вы там все время роняете-то? Shocked Все уранил да уранил... Laughing
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Вт 19 Февраль 2008 17:36    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Штаны падают Mr. Green
Кстати, отсмотрел очередную версию образцов отконтрастированных УРАНИЛАЦЕТАТОМ свинца и остался почти с чувством глубокого удовлетворения Very Happy

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 15:06    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
Штаны падают Mr. Green
Кстати, отсмотрел очередную версию образцов отконтрастированных УРАНИЛАЦЕТАТОМ свинца и остался почти с чувством глубокого удовлетворения Very Happy


Уранилацетатом свинца? Что-то незнакомое мне...
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 15:37    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Как так незнакомое?
_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 16:23    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Серьезно. Уранилацетат - уксуснокислый уранил. А уранилацетат свинца?
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
injener
Дед

Сообщения: 3196
Зарегистрирован: 21.12.2004
Откуда: Московская область
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 17:06    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:
Уранилацетат
Мне тоже казалось, что это с ураном связано... Shocked Или это соль урановой кислоты? Rolling Eyes
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 17:17    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

injener писал(а):
Цитата:
Уранилацетат
Мне тоже казалось, что это с ураном связано... Shocked Или это соль урановой кислоты? Rolling Eyes

Уранил - это, если склероз не подводит, UO3
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 17:33    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Omikron, а Вы чем срезы контрастируете? Very Happy

Уранилацетат свинца - обыкновенная двойная соль...

Чей-то вы, камрады, меня пугаете... Я аж в книжку заглянул Rolling Eyes со страху...

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 17:37    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Срезы контрастирую сначала полуспиртовым р-ром уранилацетата, а потом цитратом свинца. А вы? Поподробнее, если не трудно.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 18:18    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

То же самое Mr. Green
Только у меня сейчас пошел водный раствор уранилацетата СВИНЦА
А цитрат свинца как обычно... по Рейнольдсу...

Раньше запасал раствор цитрата свинца сделанный по прописи Sato (стабильный как черти-что!), но сейчас пока нет возможности Sad

_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 18:21    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

А как Вы готовите р-р уранилацетата свинца?
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
injener
Дед

Сообщения: 3196
Зарегистрирован: 21.12.2004
Откуда: Московская область
СообщениеДобавлено: Ср 20 Февраль 2008 19:23    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Dan758 писал(а):
Чей-то вы, камрады, меня пугаете...
Embarassed Embarassed Embarassed И то!.. Возраст... Память...
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
Показать сообщения:   
Начать новую тему   Ответить на темуОтветить
Страница 2 из 3 На страницу Пред.  1, 2, 3  След.


о проекте || новости || публикации || оборудование || события
фотогалерея
|| форум || спонсоры || ссылки

©2002 - Microscopist.ru - портал микроскопистов
:главная :контакты :карта сайта :faq :помощь Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru
Powered by phpBB © 2001-2003 phpBB Group | Часовой пояс: GMT + 3