Начало div  FAQ  div  Поиск  div  Пользователи  div  Группы  div  Избранное  div  Регистрация  div  Вход 
Список форумов Microscopist.ru arrow Подготовка образцов arrow Резка биологических объектов в FIB

Резка биологических объектов в FIB
На страницу 1, 2  След.
Начать новую тему   Ответить на темуОтветить
Автор Сообщение
pust2
Бывалый

Сообщения: 327
Зарегистрирован: 07.08.2006
Откуда: Владивосток
СообщениеДобавлено: Пн 28 Май 2007 09:47    Заголовок сообщения: Резка биологических объектов в FIB Ответить с цитатой

Всем привет!
Скажите, кто-нибудь пробовал резать биологические объекты с помощью FIB для просвета?
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Посетить сайт автора
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Пн 28 Май 2007 23:17    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Лежит порезанный образец полимерной пленки на стали, но пока не смотрел.
_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Sergey
Дед

Сообщения: 1904
Зарегистрирован: 05.11.2004
Откуда: Санкт-Петербург
СообщениеДобавлено: Пн 28 Май 2007 23:23    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:
резать биологические объекты

Цитата:
Лежит порезанный

Жуть! Evil or Very Mad
Во сюжет для ужасика Very Happy

_________________
Он же: SergeyIT, Cthutq.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Пн 28 Май 2007 23:41    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

Во сюжет для ужасика

Пока лежит смирно - не сюжет. Вот начнет шевелиться и, не дай бог, в колонну падать - вот это будет ужастик Shocked

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
pust2
Бывалый

Сообщения: 327
Зарегистрирован: 07.08.2006
Откуда: Владивосток
СообщениеДобавлено: Вт 29 Май 2007 01:34    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Всем, привет!
2Dusha, Андрей, я так понял, что это нечто органическое на подложке?

Я, то думал про несколько другое, тут пробегали микробиологи и им надо порезать нервный узел мыши, который сам по себе около 1 мм в диаметре, и не просто порезать, а так, чтобы увидеть какую-то особенную часть нервной ткани. Я с дуру взял и ляпнул, "А наш FIB, порежет, что угодно", а теперь думаю, а не "зажарит" ли луч эту ткань и т.п.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Посетить сайт автора
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Вт 29 Май 2007 08:28    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

это нечто органическое на подложке?

Вроде того. И заказчиков интересует атомное строение интерфейса полимера с металлом Mr. Green Mr. Green Mr. Green

1 мм для ФИБа немного перебор Confused
Вопрос сразу: а зачем образец для ПЭМ? При таких масштабах самое классное будет сделать томографию в FIB - это как раз то, что надо. Насколько я помню, вы получили CrossBeam?
Это я проделывал с мягкими тканями зуба (где-то на форуме есть видео), а вообще у Цайсса, например, есть примеры с клетками. Только ткани надо контрастировать, а то ничего видно не будет.
При правильных параметрах резки клеточные структуры не разрушаются. И разрешение приличное, порядка нескольких нм. И возьни куда меньше, чем с просветом. И трехмерные данные получаются.
Проблема одна: когда биологи увидят результат, они у вас FIB экспроприируют. Mr. Green

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
pust2
Бывалый

Сообщения: 327
Зарегистрирован: 07.08.2006
Откуда: Владивосток
СообщениеДобавлено: Вт 29 Май 2007 10:20    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Биологов интересует нарушения в определенных клетках (структурах) нервных тканей, т.н. паталогия. В скане не этого увидишь, я даже не пытался.

Вопрос может еще и не стлько в размере, а в том, что фиксация нервной ткани для ультратома получается неважная и качественно порезать, традиционными методами, не удается, как они (микробиологи не пытались).

Впрочем, для меня ключевая фраза "При правильных параметрах резки...", а какие они "правильные"?
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Посетить сайт автора
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Вт 29 Май 2007 16:10    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

В скане не этого увидишь

Почему?
Цитата:

а какие они "правильные"?

Первым делом надо термически напылить наверх побольше золота, чтобы защитить поверхность и для проводимости.
Потом электро и ионным осаждением нанести дополнительно слои Pt.
Режимы вроде должны подойти обычные:
до толщины 2-3 мкм резать нормально на 10 нА. Потом потихоньку уменьшать ток. Последние 200-300 нм с обеих сторон аккуратненько (в смысле острым сфокусированным пучком) на 20-50 пА, если есть охлаждение - очень даже должно помочь.
Я бы вначале попробовал разные режимы на свободном участке. Если ткань будет гореть - это сразу видно - просаживается поверхность на обширном участке вокруг разреза.

По правильному еще было бы приготовить культуру на какой-нибудь жесткой поверхности, металле или полупроводнике - а то как иначе ламелу закреплять?

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
pust2
Бывалый

Сообщения: 327
Зарегистрирован: 07.08.2006
Откуда: Владивосток
СообщениеДобавлено: Чт 31 Май 2007 12:23    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Да, классно...
Кило золота и полкило платины на один отрез Rolling Eyes
А, где-то можно об этом почитать.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Посетить сайт автора
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Чт 31 Май 2007 13:24    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

Кило золота и полкило платины на один отрез

Ну уж прям и полкило....
Просто у нас с одним образчиком (имплантированный алмаз) получился конфуз: напылили наверх золота, как обычно для проводимости несколько нанометров, потом (опять же как обычно) ионным пучком нанесли Pt. Потом на срезе нашли недалеко от поверхности чудные нанокристаллы и строили чудные гипотезы о диффузии импланта к поверхности вместе с дефектами (глубина имплантации намного больше).
Позже оказалось, что защитный слой был слишком тонким и при осаждении Pt ионный пучок его пробивал и перемешивал золото с алмазом - вот вам и кристаллики.
Цитата:

А, где-то можно об этом почитать.

Насколько я понял из разговоров, с каждым образчиком надо по-своему, так что лучший способ - пробовать. В библиотеке есть несколько статей по FIB. Я надеюсь вскорости сделать небольшую веб-презентацию - сохранилась пара видео-протоколов с демонстраций.

Хотя в случае с клетками я бы определенно ориентировался на FIB-томографию.

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
pust2
Бывалый

Сообщения: 327
Зарегистрирован: 07.08.2006
Откуда: Владивосток
СообщениеДобавлено: Пт 01 Июнь 2007 05:04    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

Хотя в случае с клетками я бы определенно ориентировался на FIB-томографию

А, это что за зверь? В смысле режем-смотрим, как, например, состав в твердотельном образце?
Статьи то и у меня есть, но там без особых подробностей...
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Посетить сайт автора
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Пт 01 Июнь 2007 08:57    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

режем-смотрим

Да, причем в разных фирмах это реализовано по разному.
Можно резать при слабом токе и одновременно снимать видео в электронах - при некотором усреднении получается неплохо, причем для непроводящих образцов есть определенные преимущества.
Можно действительно: один шаг ионным пучком, фотка в электронах, ..... В некоторых приборах это даже автоматизировано до такой степени, что система компенсирует картинку по смещению и фокусу в процессе резки, то есть картинка всегда остается в центре и резкой, несмотря на то, что реально смещается вверх и вглубь. В следующей версии обещали даже сделать динамический фокус с учетом наклона поверхности среза.
И на Цайссовских и на FEI машинах можно самому написать несложный скрипт, который будет все это делать.

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......


Последний раз редактировалось: Dusha (Пт 22 Июнь 2007 18:02), всего редактировалось 1 раз
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Dan758
Дед

Сообщения: 1276
Зарегистрирован: 28.01.2004
Откуда: Челябинск
СообщениеДобавлено: Сб 02 Июнь 2007 20:21    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Если на самом деле FIB нет - не мучайтесь и напишите в личку о проблемах. Решим, думаю.
_________________
Цапу надо было крутить! Цапу! (c)
"Я не профессионал, я широко и раскованно мыслящий дилетант" (c)
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Пт 22 Июнь 2007 16:08    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Вот на такую публикацию натолкнулся по FIB томографии клеток. PDF скачать не удалось, нету доступа. Но в онлайне все вроде видать, даже видео.
http://www.pubmedcentral.nih.gov/articlerender.fcgi?tool=pubmed&pubmedid=16713294

_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
injener
Дед

Сообщения: 3196
Зарегистрирован: 21.12.2004
Откуда: Московская область
СообщениеДобавлено: Пт 22 Июнь 2007 16:58    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:
на такую публикацию натолкнулся
Очень интересная вещь, кстати... Если удастся получить ПДФ или ДОК, прислать в библиотеку?
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Пт 22 Июнь 2007 18:02    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Однозначно. Мувики я скачал.
_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Liza
Бывалый

Сообщения: 185
Зарегистрирован: 15.03.2007
СообщениеДобавлено: Пт 22 Июнь 2007 19:48    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Нужна еще эта статейка? У меня доступ есть.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
Dusha
Дед

Сообщения: 2199
Зарегистрирован: 23.01.2003
СообщениеДобавлено: Пт 22 Июнь 2007 20:04    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Угу
_________________
- Мудрый Каа, что же нам делать?!!
- Ждитессссссс.......
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Liza
Бывалый

Сообщения: 185
Зарегистрирован: 15.03.2007
СообщениеДобавлено: Пн 25 Июнь 2007 09:55    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Bitte schön! На фтп лежит.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
injener
Дед

Сообщения: 3196
Зарегистрирован: 21.12.2004
Откуда: Московская область
СообщениеДобавлено: Пн 25 Июнь 2007 10:59    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:
На фтп лежит
OK! Можно не суетиться? Smile
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
Показать сообщения:   
Начать новую тему   Ответить на темуОтветить
Страница 1 из 2 На страницу 1, 2  След.


о проекте || новости || публикации || оборудование || события
фотогалерея
|| форум || спонсоры || ссылки

©2002 - Microscopist.ru - портал микроскопистов
:главная :контакты :карта сайта :faq :помощь Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru
Powered by phpBB © 2001-2003 phpBB Group | Часовой пояс: GMT + 3