Начало div  FAQ  div  Поиск  div  Пользователи  div  Группы  div  Избранное  div  Регистрация  div  Вход 
Список форумов Microscopist.ru arrow РЭМ (Методы) arrow Биологические объекты и РЭМ

Биологические объекты и РЭМ
На страницу Пред.  1, 2
Начать новую тему   Ответить на темуОтветить
Автор Сообщение
greeg
Гуру

Сообщения: 446
Зарегистрирован: 04.05.2006
Откуда: Ukraine
СообщениеДобавлено: Пт 27 Февраль 2009 13:23    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Согласна с Bananan-ом, мы делаем также, плюс в эпоксидку добавляем мелкодисперсный графитовый порошок. После шлифовки - слой метализации (Au). Если микроанализ делать не нужно, можно до метализции еще и прокрасить (также как для ПЭМ), травить можно слабой лимонной кислотой.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail ICQ Number
Bananan
Бывалый

Сообщения: 246
Зарегистрирован: 13.09.2007
Откуда: Самара
СообщениеДобавлено: Пт 27 Февраль 2009 13:28    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Забыл добавить, добавляем мелкодисперсный никель (от Buehler).
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение ICQ Number
ibragimkz
Бывалый

Сообщения: 59
Зарегистрирован: 17.03.2008
Откуда: Семипалатинск
СообщениеДобавлено: Пн 02 Март 2009 06:31    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Огромное спасибо за совет! Свою ошибку понял. Плохо пропитывал кость, из за этого наверное после шлифовки поверхность была вся замятой, даже при щадящем режиме. Embarassed Теперь попробую с Вашей коррекцией. Думаю получится. Правда вакуумный пост прибудет месяца через полтора, но что нибудь придумаю, например попробую полужидкой пропиткой разбавленной эпоксидкой.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
ibragimkz
Бывалый

Сообщения: 59
Зарегистрирован: 17.03.2008
Откуда: Семипалатинск
СообщениеДобавлено: Вт 24 Март 2009 07:19    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Нашел методику обработки кости. Оказалось, можно провести декальцинацию и резать на микротоме, потом с пропиткой клеить на столик. Подготовка практически как для ПЭМ. Тем кто откликнулся огромное спасибо!
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
hivigar
Новенький

Сообщения: 2
Зарегистрирован: 12.11.2009
СообщениеДобавлено: Чт 12 Ноябрь 2009 22:58    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

А кто-нибудь здесь делал препараты бактерий для РЭМ? Если да, поделитесь пожалуйста методикой.

Я подготовил препарат на алюминиевой фольге методом проведения суспензии клеток через возрастающей концентрации раствор ацетона, и столкнулся с проблемой - клетки бактерий склеились и найти отдельно лежащие потом было проблематично. Дело осложняется тем, что сейчас нет возможности напылять золото, только углерод. В результате изображение недостаточно четкое.

Теперь дилетантский вопрос: если я эти клетки напичкаю солями свинца - что-то для РЭМ изменится, или это никак не повлияет?
Второй вопрос - принципиально ли фиксировать альдегидами - или сойдет и формалин?
И третий - как думаете - может в этаноле лучше обезвоживать - я думаю, что клетки слиплись за счет гидрофобной среды - а спирт значительно гидрофильней ацетона
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
injener
Дед

Сообщения: 3196
Зарегистрирован: 21.12.2004
Откуда: Московская область
СообщениеДобавлено: Пт 13 Ноябрь 2009 01:30    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:
если я эти клетки напичкаю солями свинца
... то они конечно же, станут более контрастными... Но нужно всеже напылять чем-то проводящим.
Цитата:
может в этаноле лучше обезвоживать
Однозначно. Но спирт нужен 100-процентный. Это достигается добавлением в него медного купороса.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
VMPS
Бывалый

Сообщения: 330
Зарегистрирован: 21.05.2004
Откуда: Украина
СообщениеДобавлено: Пт 13 Ноябрь 2009 13:22    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:

напичкаю солями свинца

Это не напыление!!! И контраст только для просвечивающей электронной микроскопии.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
injener
Дед

Сообщения: 3196
Зарегистрирован: 21.12.2004
Откуда: Московская область
СообщениеДобавлено: Пт 13 Ноябрь 2009 15:40    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Цитата:
Это не напыление!!!
Вне всякого сомнения... Однако вторичные электроны тоже летят из глубины, хоть и небольшой (по литературе - 10-20 нм)... Так что, если там будет свинец, то все равно коэффициент вторичной эмиссии должен быть выше!
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение Отправить e-mail
omikron
Гуру

Сообщения: 379
Зарегистрирован: 06.04.2007
Откуда: Томск
СообщениеДобавлено: Пт 13 Ноябрь 2009 15:48    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Даже если зафиксировать четырехокисью осмия, изображение станет лучше. А вообще, попробуйте зафиксировать бактерии как для заливки смолами, т.е., альдегидная, осмиевая фиксация. Но между операциями ресуспендируйте. Это трудоемко, потому что для смены раствора нужно снова осаждать, а при этом большие потери материала. Но зато бактерии сможете найти поодиночке. Жгутики, конечно, потеряете.... Работал когда-то так с бифидум- и колибактериями.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
hivigar
Новенький

Сообщения: 2
Зарегистрирован: 12.11.2009
СообщениеДобавлено: Пт 13 Ноябрь 2009 16:37    Заголовок сообщения: Ответить с цитатой

Мне приходится работать практически "на коленке" поскольку наша лаборатория ориентирована по большей части на учебный процесс в университете, а РЭМа у нас никогда не было. Фотографии делать я хожу на другой факультет, где есть микроскоп, но там направление работы не связано с биологическими объектами.

Как следствие - смол нет, альдегидов тоже нет. Нет и четырехокиси осмия - потому что для обычной повседневной световой микроскопии бактерий вполне достаточно осторожной термической фиксации или смеси Никифорова.

Вот и приходится сочинять методику на ходу.

У меня была еще такая идея: суспендировать убитые формалином клетки в не очень концентрированном ацетате свинца, потом добавить серной кислоты, чтобы перевести свинец в нерастворимый сульфат. По идее, ионы свинца должны сгруппироваться около имеющих отрицательный заряд клеток, и, может быть, частично проникнуть в периплазматическое пространство, а потом в нерастворивой форме там "застрять". Таким образом должна получиться прочно связанная "оболочка" из сульфата свинца, причем вблизи поверхности клеток. Но это все чисто теоретически - наверняка вместо осаждения на клетках он начнет давать крупный осадок Confused

В общем даже не знаю как бы это провернуть... Или еще такая мысль - сильно насытить убитые клетки на подложке хлоридом аммония, чуть ли не в насыщенном растворе подержать, потом быстро смыть остатки раствора и высушить. Получим клетки с большой концентрацией хлорида внутри. Потом на высушенные клетки нанести раствор ацетата свинца - хлорид начнет диффундировать наружу и тут же выпадать в виде хлорида свинца, который малорастворим.
Посмотреть профиль Отправить личное сообщение
Показать сообщения:   
Начать новую тему   Ответить на темуОтветить
Страница 2 из 2 На страницу Пред.  1, 2


о проекте || новости || публикации || оборудование || события
фотогалерея
|| форум || спонсоры || ссылки

©2002 - Microscopist.ru - портал микроскопистов
:главная :контакты :карта сайта :faq :помощь Rambler's Top100 Рейтинг@Mail.ru
Powered by phpBB © 2001-2003 phpBB Group | Часовой пояс: GMT + 3